westernblot 步骤口诀
印迹转膜原理？
印迹转膜原理？
蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上。目前主流方法是电转印法，分为湿式转印与半干转印。
湿式转印是将胶块垂直方向夹在湿式转印槽内进行电转印。
以E-Blotter湿转槽为例，一般使用垂直电泳槽的缓冲液槽体，将内部垂直电泳电极替换为湿转的转印芯，将胶块、滤纸、转印棉夹到转印芯内部，将槽体倒满缓冲液通电进行电转印。
半干转印是将胶块水平方向夹在半干转印槽内进行电转印。
以Yrdimes半干转印槽为例，将滤纸、转印棉用缓冲液浸润后，与胶块一起夹到转印槽内，通电进行电转印。
一般来说湿转相对半干转印速度上要慢，设备成本上半干转印槽也相对更贵。
通常小分子量的蛋白半干转效果比较好，大分子量（100KD）以上建议湿转。
Western blot实验需要准备什么试剂和耗材？
试剂：tris、Hcl、Nacl、脱脂牛奶、甲醇、甘氨酸、tuwen20、一抗、二抗、显色剂及SDS-PAGE需要的试剂（tris、Hcl、TEMED、SDS、过硫酸铵、丙烯酰胺、N,N-甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、非预染蛋白Marker、甲醇、乙酸、考马斯亮蓝R250）、预染蛋白Marker耗材：滤纸、PVDF膜或NC膜、乳胶手套等仪器：电泳仪、电转槽、摇床、制冰机（电转时需冰浴）等
westernblot浓缩胶一般多久凝固？
大概几分钟吧，只要干了就会凝固了。
western blot电泳原理？
（本实验以转移到PVDF膜，辣根过氧化物酶HRP-ECL发光法为例）在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）中，不连续系统的凝胶包括浓缩胶（spacergel）和分离胶(separation gel)，蛋白质在浓缩胶中运动到两层凝胶的交界处时，由于凝胶孔径的不连续性使样品迁移受阻而压缩成很窄的区带，即不连续系统的浓缩效应。
在凝胶中，分子量小的蛋白质泳动速度快，分子量大的蛋白质泳动速度慢，即聚丙烯酰胺凝胶的分子筛效应。阴离子去污剂SDS使蛋白质变性，消除不同蛋白分子间的电荷差异和结构差异，使得蛋白质在电场中的泳动速度仅与蛋白质颗粒大小有关。各种蛋白质在不连续SDS-PAGE的浓缩效应和分子筛效应的作用下，按照分子量大小以一定顺序排列形成一个个区带。