western
western blot是什么实验？
blot是什么实验？
western blot是一种非常经典的定性、定量检测蛋白表达的方法。其原理通俗来说：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳,蛋白质是被检测物,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。
经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。
wb制好的胶不用怎么保存？
Western blot 配置好的page胶。必须放在4度，并且保持湿润的状态，要不然胶体会干。影响后续的实验结果。
westernblot需要多少重复？
出开始学的时候可能需要十来次甚至几十次，做熟练了就几次就可以得出比较稳定的结果了
western原理和步骤？
Western blot（也称为蛋白质免疫印迹）是一种常用于研究中分离和鉴定蛋白质的技术。它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质，然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上，接下来将膜与对感目标蛋白质的特异抗体一起孵育。
操作步骤：
1.准备样品
1）制冰，准备冰盒。
2）配制细胞裂解液：根据细胞数量确定所需裂解液：50ul/六孔板一孔 。
裂解液配方：100ul碧云天裂解液 1ul蛋白酶抑制剂混合物 1ul PMSF
3）按实验需要准备好细胞：去掉培养基，1×PBS洗3次（去掉培养基中的血清），每个孔（6孔板）加入适量的裂解液。迅速用细胞刮刮下细胞并转移至1.5ml管中，置于冰上20min，振荡混合后，再置冰上10min。
4）12，000g，4℃离心15min，收集上清至另一1.5ml管。
wb实验步骤及原理？
Western Blot 实验原理
WB 是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。
Western Blot 分类
根据显色方法主要有以下几种：
放射自显影
底物化学发光 ECL
底物荧光 ECF
底物 DAB 呈色
现在常用的有底物化学发光 ECL 和底物 DAB 呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，目前发表文章通常是用底物化学发光 ECL。只要买现成的试剂盒就行， 操作也比较简单，原理如下（二抗用 HRP 标记）：反应底物为过氧化物 鲁米诺，如遇到 HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。