Western
Western Blot时，上样量是多少由什么决定？
Blot时，上样量是多少由什么决定？
用westernblot做NF-KB定量测定因为NF-KB在总蛋白中的含量不到0.1%，建议将样品浓缩后再点样NF-KB通常每泳道要上样30~50ug。但如果样品量太少了，可以通过高浓度1抗孵育并增加曝光时间来解决所以用westernblot做NF-KB定量测定，一般需要的上样量是30~50ug
western数据用哪种方法分析？
western blot因为是一种定性的实验，所以它的单次结果一般不是以数据形式出现的
而即使是灰度值分析也并不需要过于精确的数字
如果有数据产生，一般是批量多次western blot结果的一个统计数据
一般采取方差分析或者t检验分析就可以了
tbst洗膜原理？
TBST 缓冲液是生物学中常使用的等渗缓冲盐溶液，主要用于 Western Blot 实验中洗去膜上非特异性结合 的抗体等试剂。
由 Tris-HCl 构成稳定的 PH 缓冲体系，NaCl 提供等渗条件，Tween-20 作为去污剂可增加缓冲液 的洗脱能力
ecl显影液原理？
ECL在化学领域，是一种化学发光试剂。electrochemiluminescence
化学发光试剂，
一般是WesternBlot的最后一步，加入1：1的溶液A和溶液B，覆盖pvdf膜，可以显色来观察实验结果。
原理：
一般使用的发光液A和B分别是鲁米诺和 过氧化氢，在 辣根过氧化物酶（HRP）的催化作用下，鲁米诺与过氧化氢反应生成一种过氧化物，过氧化物不稳定随即分解，形成一种能发光的电子激发中间体，当后者由激发态返回至基态，就会产生荧光。
在发光过程中不需要消耗HRP,HRP只是起催化作用，所以只要HRP没降解失活，是可以重复加发光液的。但HRP作为一种蛋白酶，在室温放置时间过长，是会降解的；同时在发光过程中有什么物质（比如显影液）污染了膜的话,也有可能灭活膜上的HRP。
western blot电泳时连成一条直线是因为什么？
westernblot显影结果连成一条线很有可能是1.上样量太大了——将上样量至少减一半2.拔掉梳子后，你是否将上样孔整理漂亮了——将孔与孔之见的胶检查下3.曝光时，在胶片与膜放在一起时是否一次压下，未有任何相对位移——一定要一次压下4.建议转膜结束后用丽春红之类的做一下非特异的蛋白染色，看下其它蛋白是否泳道分开5.本人认为，你很有可能是上样量太大了